液相色譜儀(yi) 已經越來越智能了，對於(yu) 很多人來說簡單易操作，容易上手，但是為(wei) 了多做樣品而忽略了一些*的步驟，往往得不償(chang) 失，那麽(me) 哪些操作不能做？哪些懶兒(er) 不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎麽(me) 辦？

　　流動相不過濾

　　因為(wei) 塵埃或其它任何雜質微粒都會(hui) 磨損柱塞、密封環、缸體(ti) 和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體(ti) 微粒。流動相在玻璃容器內(nei) 蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。

　　使用後沒有及時清洗泵

　　流動相不應含有任何腐蝕性物質，含有緩衝(chong) 液的流動相不應保留在泵內(nei) ，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩衝(chong) 液的流動相留在泵內(nei) ，由於(yu) 蒸發或泄漏，甚至隻是由於(yu) 溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體(ti) ，這些晶體(ti) 將和上述固體(ti) 微粒一樣損壞密封環和柱塞等。

　　因此，必須泵入純水將泵充分清洗後，再換成適合於(yu) 色譜柱保存和有利於(yu) 泵維護的溶劑（對於(yu) 反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

　　流動相走空

　　泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nei) 的流動相被用完，否則空泵運轉也會(hui) 磨損柱塞、缸體(ti) 或密封環，終產(chan) 生漏液。

　　沒有流動相流出，又無壓力指示怎麽(me) 辦？

　　可能是泵內(nei) 有大量氣體(ti) ，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個(ge) 50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體(ti) 。另一個(ge) 可能原因是密封環磨損，需更換。

　　壓力和流量不穩了？

　　原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nei) 有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nei) 超聲清洗。有時可能是砂濾棒內(nei) 有氣泡，或被鹽的微細晶粒或滋生的微生物部分堵塞，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nei) 超聲除氣泡，或將砂濾棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nei) 迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。

　　壓力為(wei) 啥過高或過低？

　　可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。

　　在進行梯度洗脫時，由於(yu) 多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：

　　PS：（在液相色譜中對組分複雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個(ge) 分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為(wei) 梯度洗脫。從(cong) 而可以使一個(ge) 複雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。

　　梯度洗脫的優(you) 點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）

　　梯度洗脫的流動相選擇不當

　　要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nei) 混溶，超出範圍後就不互溶，使用時更要引起注意。

　　當有機溶劑和緩衝(chong) 液混合時，還可能析出鹽的晶體(ti) ，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

　　忽略的空白梯度洗脫

　　梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質峰，因為(wei) 弱溶劑中的雜質富集在色譜柱頭後會(hui) 被強溶劑洗脫下來。

　　用於(yu) 梯度洗脫的溶劑需*脫氣，以防止混合時產(chan) 生氣泡。

　　忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化

　　混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為(wei) 流動相時的兩(liang) 倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的大壓力。

　　關(guan) 於(yu) 六通閥的正確使用和維護

　　①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。

　　②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nei) 壓力劇增，甚至超過泵的大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

　　③為(wei) 防止緩衝(chong) 鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝(chong) 洗進樣閥。通常可用水衝(chong) 洗，或先用能溶解樣品的溶劑衝(chong) 洗，再用水衝(chong) 洗。

　　關(guan) 於(yu) 色譜柱的使用和維護

　　色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會(hui) 降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。

　　調節流速太快

　　避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從(cong) 高處掉下都會(hui) 影響柱內(nei) 的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(hui) 衝(chong) 動柱內(nei) 填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。

　　反衝(chong) 色譜柱

　　一般說來色譜柱不能反衝(chong) ，隻有生產(chan) 者指明該柱可以反衝(chong) 時，才可以反衝(chong) 除去留在柱頭的雜質。否則反衝(chong) 會(hui) 迅速降低柱效。

　　預柱和保護柱

　　選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前麵連接一預柱，分析柱是鍵合矽膠時，預柱為(wei) 矽膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被矽膠“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。

　　避免將基質複雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nei) ，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。