去磷酸化指的是水解去除磷酸(PO43−)基團的過程。在對蛋白質或DNA去磷酸化時，需要使用酶或水解酶切割酯鍵。例如，磷酸酶可將磷酸單酯水解為(wei) 磷酸根離子和帶有遊離羥基(OH)基團的分子，從(cong) 而去除磷酸基團。 默提供各類生命科學解決(jue) 方案和服務

1.利用小牛腸堿性磷酸酶對DNA進行去磷酸化

材料

牛小腸堿性磷酸酶（貨號 P4978）
10X CIP緩衝(chong) 液（貨號C3225）
1 M NaCl
0.5 M Tris-HCl，25 °C下pH 7.9
0.1 M MgCl2
0.01 M 二硫蘇糖醇

存儲(chu) 緩衝(chong) 液

10 mM Tris-HCl, pH 8.2
50 mM KCl
1 mM MgCl2
0.1 mM ZnCl2
50%甘油

操作流程：

1. 1X CIP緩衝(chong) 液溶解DNA(0.5 µg DNA/10 µL)。

2. 對於(yu) 5’突出的粘末端DNA加入0.1單位/皮摩爾的CIP；對於(yu) 3'突出的粘末端或布路姆試劑加入1單位/皮摩爾。

3. 在37℃孵育60分鍾。

4. 苯酚/氯仿2（貨號P3803 或P2069）提取或凝膠純化DNA。*

5. 乙醇沉澱法恢複DNA。2

*注意：苯酚提取或凝膠純化後無需再熱滅活。

熱滅活：對於(yu) 牛腸酶，在5毫摩爾/升的乙二胺四乙酸下，加熱至75℃10分鍾，可使95%以上的活性失活。 注意：大腸杆菌的堿性磷酸酶比牛腸酶在高溫下更穩定，也更耐熱滅活。